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一、新课导入
请同学回答：食品中细菌菌落总数检验包括哪几个步骤？
正确回答：包括1.检样。2.10倍系列稀释。3.选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL 分别加入无菌培养皿内。4. 每皿中加入15 mL～20 mL平板计数琼脂培养基，混匀。5.培养。6. 计取各平板菌落数,计算菌落总。7.报告
今天的教学内容是完成前面五个步骤，步骤第六、七将在下节课中进行介绍。PPT显示今天的学习任务：1.知道饮用水中细菌菌落检验的流程。2. 会正确选用设备、器皿、试剂、培养基及样品制备。3.会按无菌操作要求正确操作，初步建立无菌操作意识。
二、教师讲解示范饮用水中细菌菌落总数的检验流程及无菌操作要求
1、呈现检验流程图
2、教师边操作演示边讲解检验流程及无菌操作要求
接下来老师进行操作演示，并进行操作要领的讲解，请同学们仔细观看。
步骤一，取所需的试剂：含0.85%灭菌生理盐水试管3支。
步骤二，对培养皿和含0.85%灭菌生理盐水试管进行编号。编号原则：培养皿标0，-1，-2，空，代表稀释度即原液、1：10倍、1：100倍、空白，每个稀释度做两块平皿，所以共用八块平皿，试管上标-1，-2，空。
步骤三，消毒双手和桌面。拿取一块酒精棉球擦桌子、接下来再拿取一块酒精棉球擦一只手，最后拿取另块棉球擦另一只手，总共用了三块棉球。这是无菌操作内容之一。
步骤四，检样。饮用水直接取用。
步骤五，10倍系列稀释及接种。用1 mL 无菌吸管吸取饮用水原液于两个标号为“0”的无菌平皿内。再用这一根1 mL 无菌吸管吸取饮用水原液，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 0.85%灭菌生理盐水的无菌试管中，振摇试管使其混合均匀，制成1:10 样品匀液。换一根1 mL无菌吸管吸取 1:10匀液于两个标号为“-1”的无菌平皿内。再用这一根1 mL 无菌吸管吸取1:10匀液注入含有9 mL0.85%灭菌生理盐水的无菌试管中，振摇试管，制成1:100 的样品匀液。更换一根1 mL无菌吸管吸取 1:100匀液于两个标号为“-2”的无菌平皿内。此时，再更换一个1 mL无菌吸管吸取空白稀释液（0.85%灭菌生理盐水）加入两个标号为“空白”的无菌平皿内，作空白对照。倒入冷却至46℃的平板计数培养基15-20ml于培养皿中，混匀，冷却。
步骤六是培养。待培养基凝固后，倒置于36℃ 士1℃细菌培养箱中，培养48 ±2 h。
根据老师操作演示，可以知道无菌操作贯穿于整个检验流程中，所以无菌操作尤为重要，在本次实验中的无菌操作需注意的是：（1）打开有盖子的器皿或容器（如试管、锥形瓶、稀释瓶、样品罐等）前，要过火。过火的部位为盖子与试管的接缝处。（2）关盖前，盖子和试管或容器口要分别过火。（3）同一根吸量管反复使用时需要在酒精灯上来回过火三次。（4）整个操作应在以酒精灯为中心，半径为15cm的范围内。（5）吸管或吸头尖端不要触及稀释液面。在同学们进行操作练习之前，还须强调以下下几点：1）在实验过程中要注意安全问题。由于用到了明火，请大家操作结束后及时关闭酒精灯。此外，同学们观察结果时，拿取发酵管时要拿在试管处，不要拿在试管盖上，否则容易导致试管和试管盖脱落，里面的大肠菌群掉落出来。因为大肠菌群作为粪便污染的指示菌，里面可能存在着肠道致病菌，万一掉落，可能会对人产生一定的危害性。所以同学一定要正确的拿取，并且要轻拿轻放。2）微生物实验室里不允许同学们带水或食物进来，所以如果有同学带进来，那么在实验开始前，先将物品拿出去。3）在实验过程中，大家坐在自己位置上进行操作，不要站起来，更不能嬉闹。接下来的时间就留给学生进行实操练习。
三、学生分组操练饮用水中细菌菌落总数的检验
1、学生根据教师操作演示的过程及无菌操作的要求，分组操练完成饮用水中细菌菌落总数的检验。
2、教师根据学生操练的实际情况加以指导和纠正。
四、教师点评
根据同学们所完成任务的情况，老师总结几点：（1）整个实验都必须遵循无菌操作，接种时间不得超过15分钟。（2）培养基必需冷却至46℃左右才能倒入培养基中，如果温度太高，会将样液中的微生物杀死，导致检验结果不准确。（3）倒入平皿的培养基需待其凝固后才能倒置于培养箱。希望同学们能够记住这几点，在今后的实验中能够操作更加正确。
五、课堂总结
1、提问：
（1）本实验中要求的无菌操作内容有哪些？
正确回答：接种食品前，首先用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；接种样品、转种菌种必须在酒精灯前操作，接种时，吸管从包装中取出后及打开试管盖都要过火消毒；从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖部不得触及试管或平皿边；接种时，打开培养皿时间应尽量短；平皿接种时，通常把平皿的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。
（2）本实验中所用到了哪些培养基、试剂、仪器设备？
正确回答：1、培养基与试剂：平板计数培养基、0.85%灭菌生理盐水
2、仪器设备：水浴锅、培养箱
（3）细菌菌落总数培养的条件是什么？
正确回答：36℃ 士1℃，48 ±2 h
2、老师总结本节课的知识要点 | 
